微生物鉴定是指借助现有的分类系统，通过对未知微生物的特征测定，对其进行细菌、酵母菌和霉菌等大类的区分，或属、种及菌株水平确定的过程。微生物鉴定技术主要包括表型微生物鉴定和基因型微生物鉴定，其中表型微生物鉴定就是微生物常规鉴定技术，包括形态学观察、生化反应试验、血清学试验等常规鉴定技术。

　　形态学观察

　　细菌形态学观察包括细菌的形态结构和培养特性观察。

　　1. 细菌通过染色可在显微镜下对细菌的形态、大小、排列方式及染色特性等进行观察。

　　2. 不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种细菌在一定条件下，培养特征具有稳定性。

　　生化反应试验

　　微生物生化反应是指用化学反应来测定微生物的代谢产物。

　　1. 糖类代谢试验

　　（1）糖（醇、苷）类发酵试验：不同微生物分解利用糖类的能力有很大差异，产生的代谢产物亦随细菌种类而异，有的仅产酸，有的产酸产气。本实验主要用于对肠杆菌科细菌的鉴定。

　　（2）氧化/发酵（O/F)试验：观察细菌在对葡萄糖分解过程中是利用分子氧（氧化型），还是无氧降解（发酵型），或不分解葡萄糖（产碱型）。利用此试验可区分细菌的代谢类型，用于细菌种属间的鉴别。

　　（3）β-半乳糖苷酶试验（ONPG)试验：主要用于迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定。迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG试验阳性，如埃希菌属、枸橼酸杆菌属、克雷伯菌属等；不发酵乳糖的细菌如沙门菌属、变形杆菌属等均为阴性。

　　（4）七叶苷水解试验：主要用于鉴别D群链球菌与其他链球菌，如粪肠球菌七叶苷试验阳性，肺炎链球菌阴性。

　　（5）甲基红（MR）试验：主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别，前者为阳性（红色），后者为阴性（黄色）。此外沙门菌属、志贺菌属、变形杆菌属、枸橼酸杆菌属等为阳性，肠杆菌属、哈夫尼亚菌属等为阴性。

　　（6）V-P试验：本试验常与甲基红试验联合应用。前者为阳性的细菌，后者都为阴性，反之亦如此。

　　2. 蛋白质和氨基酸分解试验

　　可用于鉴别细菌，包括（1）吲哚试验：有些细菌具有色氨酸酶，能分解培养基中的色氨酸，生成吲哚，吲哚与对二甲氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。主要用于肠杆菌科细菌的鉴定。（2）硫化氢试验主要用于肠杆菌科的鉴别，如沙门菌属、爱德华菌属、枸橼酸杆菌属、亚利桑那菌属和变形杆菌属细菌为阳性（黑色），其他菌属阴性。此外还包括尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验以及氨基酸脱羧酶试验等。

　　3. 碳源利用试验

　　包括枸橼酸盐利用试验、丙二酸盐利用试验、醋酸盐利用试验、马尿酸盐水解试验、乙酰胺利用试验等。

　　4. 酶类试验

　　（1）触酶（过氧化氢酶）试验：有些细菌具有过氧化氢酶，可把过氧化氢分解成水和新生态氧，进而形成分子氧出现气泡。主要用于革兰阳性球菌的初步鉴定。葡萄菌属和微球菌属触酶试验阳性，链球菌属触酶试验阴性。

　　（2）氧化酶试验：是细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶。主要用于肠杆菌科和非发酵菌的鉴定，前者多为阴性，弧菌科、非发酵菌多为阳性。

　　（3）凝固酶试验：用于鉴定葡萄球菌的致病性。金黄色葡萄球菌产生凝固酶，使血浆凝固（致病性）。而表皮及腐生葡萄球菌的凝固酶则阴性（非致病性）。

　　5. 其他试验

　　包括胆汁溶菌试验，用于肺炎链球菌和ɑ链球菌的鉴别，前者为阳性，后者为阴性。协同溶血试验（CAMP）主要用于鉴定B群链球菌（阳性），其他链球菌阴性。杆菌肽试验用于A群链球菌（几乎100%敏感）与其他链球菌（耐药）。奥普托欣（Optochin）试验用肺炎链球菌（敏感）与其他链球菌（耐药）的鉴别。O/129抑菌试验用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属细菌对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。

　　血清学试验

　　血清学试验是抗原抗体在体外出现可见反应的总称，可以用已知抗体（细菌抗血清）检测未知抗原（待检细菌），也可用已知抗原（已知病原菌）检测患者血清中的相应细菌抗体及其效价，是临床诊断、实验室研究和细菌学鉴定的重要手段之一。包括有凝集试验、荚膜肿胀试验等。其中荚膜肿胀试验常用于肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌和炭疽芽孢杆菌等细菌的检测和荚膜分型。

　　防城港市第一人民医院  吴春礼